新型冠状病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR）操作视频
02:51通用名称：新型冠状病毒（-nCoV）(ORF1ab/N)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
本试剂盒适用于体外定性检测年底武汉新发现的新型冠状病毒（novelcoronavirus，-nCoV，缩写为NC）核酸。
本试剂盒采用实时荧光RT-PCR方法，可用于咽拭子等样本中新型冠状病毒（-nCoV）核酸的实验室检测，检测结果仅供研究，不用于临床诊断。
本试剂盒利用实时荧光PCR技术，选取新型冠状病毒（-nCoV）ORF1ab和N基因作为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光探针，N基因探针采
用FAM标记，ORF1ab探针采用HEX标记，进行一步法RT-PCR扩增，检测样本中是否含有新冠状病毒RNA。
1.适用样品类型：
1.1上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、深咳痰液；
1.2下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、肺组织活检标本。
2.样品采集（注意无菌操作）
2.1咽拭子：用咽拭子用2根拭子同时擦拭扁桃体及咽喉壁，将拭子头浸入含采样液管中；
2.2鼻拭子：将1根拭子插入鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，取另一拭子以同一方法取另一侧鼻孔，将拭子头浸入含采样液管中；
2.3鼻咽抽提物和呼吸道抽取物：用与负压泵连接的收集器从鼻咽部抽取粘液，并用2ml采积液冲洗收集器1次；
2.4深咳痰液：要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于含采样液的螺口管中；
2.5支气管灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘
液，并用采样液冲洗收集器1次；
2.6肺泡灌洗液：局部麻醉后将纤维支气管镜通过口或鼻经过经咽部插入右肺中叶或左肺舌段的支管，将其顶端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓加入灭
菌生理盐水，每次30-50ml，总量-ml，不应超过ml。
2.7肺组织活检标本：在超声或X线定位下，经皮穿刺取肺组织活检标本，置于含采样液的螺口管中。
3.样品保存和运送
所采集的样本可立即用于测试，或保存于-20±5℃待测，保存期为4个月，样本应避免反复冻融。样本运送采用0℃冰壶或加冰并以泡沫箱密封，低温运输
时间不应超过8h，长途运输建议采用干冰以保持低温。标本处理和RNA提取亦可参照有关国家标准或有关行业标准中推荐的方法。
1.样本处理和核酸提取（样本处理区）
建议取μl液态样本进行核酸提取。可采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂盒（如：核酸提取或纯化试剂（磁珠法）：
粤穗械备号；核酸提取或纯化试剂（离心柱法）：粤穗械备号、核酸提取或纯化试剂（磁珠法）：粤穗械备号）；也可使用
其他的商业化产品，具体操作步骤请按照试剂盒说明书指引进行。
本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；阳性质控品不参与提取，用于PCR检测试剂的质控。
2.PCR试剂准备（试剂准备区）
从试剂盒中取出NC(ORF1ab/N)PCR反应液A、NC(ORF1ab/N)PCR反应液B，室温融化后振荡混匀，8,rpm离心数秒后使用。
取N个（N＝待测样本个数+阴性质控品+NC(ORF1ab/N)阳性质控品）PCR反应管
NC单人份扩增体系配制如下表：